制备原代组织样品的单细胞悬浮液,可应用全自动温和组织处理系统,不但可以有效的防止细胞的过度损耗,还能使标记靶细胞达到较大值,优化细胞的分选;收集组织细胞标本,还可制成细胞悬液以供下游分离。
通常细胞的培养会被分为悬浮培养和贴壁培养两种,又因为细胞的增殖有可能会形成不同大小的细胞块状或片状结构。若一块中有两个或更多的细胞粘连在一起或细胞碎片过多,都会影响FCM的结果,从而导致实验的失败。因此,合格的培养单细胞悬液制备是非常重要的,进而就应用到了全自动温和组织处理器。
培养样品单细胞悬液分离的制备方案
1、应用百分之0.04的乙二胺四乙酸二钠盐或是百分之0.29的胰蛋白酶进行消化3~7分钟,时间主要是取决于室温的状况,直到光镜下壁的细胞间出现筛状的间隙,然后放弃消化液,加入PBS液体。
2、使用一根吸管将其细胞从瓶壁中轻轻吹出,然后移入离心管内。
3、进行低速的短期离心,即800~1000r/min,5分钟即可。
4、弃上清,加pH7.4的PBS溶液,短时低速离心,重复进行2~3次,去除细胞悬液中的细胞碎片。
5、加入少量的PBS液体,轻吹均匀沉淀池。增加固定液或低温保存,等待下次应用。
因此在做细胞培养制备时,还需全自动温和组织处理系统的应用,可更好更完善的分离细胞悬浮液,获得自己所需的制备样品。