肌肉组织因其纤维含量高、细胞间连接紧密的性质特点，一直是单细胞悬液制备中的难点样本。与肝、脾等软组织相比，肌肉组织中的肌纤维被致密的结缔组织层层包裹，传统的手工消化方式难以破坏这些结构，往往会存在细胞解离不充分、细胞活力低、重复性差等问题，严重影响了下游的单细胞测序、流式分析等实验的数据质量。

　　实验目的：应用上海净信JX-DLDXB-4单细胞悬液制备仪处理小鼠肌肉组织。该案例由终端客户在常规实验条件下完成，旨在为从事肌肉组织单细胞研究的各位老师提供一份可重复的实验参考方案。

　　实验仪器：单细胞悬液制备仪JX-DLDXB-4

　　样品类型：小鼠肌肉组织

　　样品用量：约200mg

　　消化酶用量：1.5mL

　　实验程序：肌肉程序，运行时间25分钟

　　后续实验：流式细胞术检测及表面抗原分析

　　此次实验所用的消化酶为净信酶离者系列配套的组织单细胞解离酶试剂盒，针对肌肉组织优化了配比，能够高效降解细胞外基质中的胶原蛋白和弹性蛋白，配合仪器的机械切割作用实现“双效解离”。

　　小鼠肌肉组织单细胞悬液制备的实验操作流程：

　　1.仪器预热：开启JX-DLDXB-4单细胞悬液制备仪，选择对应程序。

　　2.组织清洗与处理：取新鲜离体的肌肉组织样品，用预冷的PBS（含1%双抗）清洗2~3次，去除血液残留和组织碎片。用眼科剪将组织充分剪碎至1~2mm³大小，这是提高解离效率的关键步骤——组织块越小，消化酶与组织的接触面积越大，酶解反应越充分、越均匀。

　　3.加酶消化：将剪碎的组织转移至仪器配套离心管中，加入2mL配套消化酶。将离心管安装到仪器适配器上，安装加热套以确保消化温度恒定。启动肌肉程序，仪器开始运行。程序运行过程中，转刀双向旋转产生机械剪切力，配合酶的化学消化作用，同步破坏组织结构和细胞外基质。

　　4.终止消化：程序运行过程中，可暂停仪器查看消化进度。用移液枪吹打观察组织状态：若组织已基本消化为絮状或无明显肉眼可见组织块，则可停止运行。立即加入等体积的终止液（按1:1比例终止消化反应），轻柔混匀，避免过度消化导致细胞膜损伤和活力下降。

　　5.过滤与重悬：使用去碎片试剂进行碎片去除处理后，将细胞悬液通过70μm细胞筛网过滤，去除未完全消化的组织碎片和结缔组织残余。收集滤液，400g离心5分钟，弃上清，用适量PBS或含BSA的缓冲液重悬细胞沉淀，调整至所需细胞浓度。

　　实验结果：终端客户对仪器及实验效果表示满意，认为该方案相较于传统手工消化在操作便捷性和结果稳定性上均有显著提升。客户反馈，过去手工消化肌肉组织通常需要60~90分钟，且批次间差异明显；使用JX-DLDXB-4后，整个消化流程标准化，实验重复性大幅提高。

　　实验结论：使用JX-DLDXB-4单细胞悬液制备仪的肌肉程序，仅用25分钟即可完成约200mg小鼠肌肉组织的充分解离。消化后细胞悬液状态良好，可直接用于流式细胞术检测及表面抗原分析等后续实验，终端客户对仪器及实验效果表示满意。

　　与传统手工消化方法对比：

　　肌肉组织的单细胞悬液制备长期以来依赖手工消化，操作者需要反复用移液枪吹打、定时观察消化状态，整个过程耗时长且高度依赖个人经验。以下对比可直观展示JX-DLDXB-4转刀款的优势：

　　实验注意事项：

　　◆ 安装加热套，确保消化温度恒定。

　　◆ 组织需充分剪碎后再加入消化酶，以提高解离效率。

　　◆ 消化完成后加入终止液时，建议按1:1比例终止，避免过度消化损伤细胞。

　　◆ 后续进行流式实验时，建议实验间隔时间控制在4小时以内，以保证细胞状态。

　　单细胞悬液制备仪的产品亮点：

　　◆ 25分钟快速解离：预设程序一键启动

　　◆ 磁珠剪切技术：温和高效无死角

　　◆ 高重复性：标准化程序输出

　　◆ 细胞活力好：可直接用于下游实验安装加热套，确保消化温度恒定。