在单细胞转录组测序实验操作中,很多都是需要从各种生物样本细胞中制备细胞悬液;而针对不同的生物样本类型,如何获取到活性高、完整性好、结团率低的单细胞悬液,这是单细胞实验成功的关键。那对于小鼠肝肾脾样品的细胞悬液实验操作该如何进行呢?
实验设备:单细胞悬液制备仪 JX-CKSM-48WK
小鼠肝肾脾样品的细胞悬液制备实验过程:
1.打开仪器开关,打开加热模块,加热
2.取活体组织后,放入PBS液中去红,然后取20-50mg,分成6-8等分
3.用移液器把消化酶加入2ml的研磨套装管中,将加满消化酶的离心管放入预热模块中预热3-5分钟
4.将处理好的组织用镊子转移到加满消化酶的离心管中
5.将装有消化酶和组织的离心管放置到加热板中,选择25分钟程序,开始运行
6.程序结束取出离心管,将消化好的组织液转移到过滤管中,即得到一管单细胞悬液
小鼠肝肾脾样品细胞悬液制备实验前后对比效果图:
样品悬液制备的实验注意事项
1、消化酶和终止液均需要在冷冻环境下保存。
2、消化酶解冻时需在常温条件下解冻,不可以放入水浴或者其他加热仪器中解冻,温度升高对酶的活性会有很大的影响。
从新鲜组织中制备高活性和高质量的单细胞悬液是单细胞转录组测序至关重要的一步,很多单细胞实验折戟在此。常见的问题诸如细胞活性低,细胞背景不干净,细胞碎片多,细胞结团率高等。科研者单细胞悬液制备仪具有组织高利用率、单细胞化过程高效、细胞活性高的特点,常应用于流式细胞术/单细胞测序/原代细胞培养等实验。