实验目的:本次实验对象是小鼠肺组织,经过单细胞制备仪制作后用流式细胞检测活细胞得率。
样品介绍:细胞样品的制备在流式细胞检测过程中十分重要,获取活性高、完整性好的的单细胞悬液可以大幅度提高实验的效率和成功率。
实验设备:单细胞悬液制备仪 JX-CKSM-WK系列
小鼠肺组织的前处理实验操作过程:
步骤一:手动将运行模块(样品槽)移至加热模块一侧,打开电源开关,点击热板模块加热和运行模块加热,静待5分钟左右使模块温度上升至所需温度,一般为37.5°C。
步骤二:将要研磨的小鼠肺组织样品剪成 1mm 以下的小块放入专用配套样品试管中,加入消化液,消化液要尽量加满,避免试管中有气泡。
步骤三:将要研磨的小鼠肺组织样品剪成 1mm 以下的小块放入专用配套样品试管中,加入消化液,消化液要尽量加满,避免试管中有气泡。
步骤四:将试管从预热模块中取出放入运行模块中
步骤五:合上仪器盖,选定程序,点击启动,运行半小时左右,程序停止后一会儿开盖观察试管中样品的消化情况,若还有大块组织存在,可以自定义程序选择8000rpm,1min启动。
步骤六:待消化液运行完后取出样品,上下振荡样品管十下,观察浑浊度和颜色,过细胞筛网后加入终止液即是单细胞悬液。
实验操作注意事项:
1.消化酶和终止液均需要在冷冻环境下保存。
2.消化酶解冻时需要在常温条件下解冻,不可以放入水浴或者其它加热仪器中解冻,温度升高对酶的活性会有很大的影响。
4.单次样品量不要超过研磨管内珠子的大小。
5.程序运行结束后不要立马取出样品,可以稍等一分钟后再取出。
小鼠肺组织的前处理的实验结果:上流式测细胞活率为96.8%,满足实验需求
小鼠肺组织样品的前处理研磨实验前后效果图
上海净信单细胞悬液制备仪能够快速完成组织到单细胞的过程,降低细胞逆境时间,提高细胞存活率。总的来说,净信单细胞悬液制备仪具有组织高利用率、单细胞化过程高效、细胞活性高的特点,常应用于流式细胞术/单细胞测序/原代细胞培养等实验。