在单细胞测序(scRNA-seq)、流式分选、类器官培养实验中,测序数据好不好,往往在样本放进测序仪之前就已经决定了。而其中最不可控、最考验手感的环节,就是把一块组织温和而彻底地"拆"成一个个活细胞。这次我们用一次真实的小鼠背根神经节(DRG)单细胞悬液制备实验,聊聊上海净信单细胞悬液制备仪,是如何把这个"玄学"环节做成标准流程的。

一、神经组织:解离界公认的"硬骨头"
背根神经节(DRG)是感觉神经系统的"中转站",也是研究疼痛机制、神经损伤修复、感觉神经元异质性的关键样本。但它同时也是解离难度最高的组织之一:
1. 细胞外基质致密,消化液难以均匀渗透;
2. 神经元胞体脆弱、轴突细长,机械剪切稍重就断;
3. 细胞间黏附紧密,手工剪碎加吹打,常常"要么没拆开、要么拆过头"。
传统手工解离的痛点,集中在三个字上:慢、飘、差——耗时长、批间波动大、活率与得率不稳定。同一份方案,换个人操作,结果可能就不一样。
二、实验概况:小鼠背部 DRG → 单细胞悬液
实验目的:将小鼠背部 DRG 制备成单细胞悬液。
1. 组织样本:小鼠背部 DRG × 6
2. 消化时间:约30min以内
3. 解离设备:单细胞悬液制备仪(组织解离仪)
4. 终末处理:终止液终止 → 过滤 → 离心 → 重悬细胞
三、单细胞悬液制备仪对小鼠背根神经节前处理制备的实验操作
1. 预热:连接仪器电源,打开开关,打开预热,选好程序备用。
2. 解冻试剂:消化酶和终止液提前用流动自来水解冻,让其混合更加均匀。
3. 取材:小鼠断颈处死后,取出 DRG 神经节,放入装有 PBS 的培养皿中,置于冰上。
4. 剪碎 + 第一轮消化:将选取的DRG 组织用 PBS 洗涤后,用眼科剪剪去尾部,放入消化管,加入消化酶
5. 自动停止:时间结束后,仪器自动停止,减少人为操作引入的误差。
6. 终止与重悬:按照比例加入终止液终止消化,过滤, 离心 ,弃上清,重悬细胞,即得单细胞悬液。
四、实验结果:显微镜下的单细胞悬液
解离完成后,取适量细胞悬液于显微镜下观察:

▲ 显微镜下的单细胞悬液(实验实拍)
细胞分散度良好,背景较为干净,未见明显的大块组织残留,符合下游单细胞测序、流式分析的样本要求。
五、单细胞悬液制备仪为什么能做到?
1. 酶解 + 磁珠剪切,协同解离:高密度剪切磁珠在恒温条件下持续、温和地扰动组织,配合消化酶降解细胞外基质与黏附分子——既"拆得开",又"伤得少"。
2. 全自动、参数可编程:程序一键设定,把依赖手感的"手艺"变成可复现的"工艺",显著降低批间差异。
3. 精准控温:恒温消化,避免温度波动造成的细胞活性流失,对神经、免疫等脆弱样本尤为友好。
4. 密闭消化管,标准化耗材:降低污染与气溶胶风险,也让不同操作者之间的结果更趋一致。
一台可靠的单细胞悬液制备仪,解决的不只是"省时间",更是让每一次实验结果都具备可复现性。从6个 DRG,到高活率单细胞悬液,30 分钟内,一键完成。
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